酶標(biāo)儀與分光光度計的區(qū)別與優(yōu)缺點
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酶標(biāo)儀和分光光度計都是實驗室常用的分析測量工具,它們的測定原理是相同的,都是使用朗伯-比耳定律,測定的都是樣本的吸光度。
一、酶標(biāo)儀和分光光度計的三大差別
酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗的專用儀器又稱微孔板檢測器??珊唵蔚胤譃榘胱詣雍腿詣?大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個比色計,即用比色法來進(jìn)行分析。測定一般要求測試液的最終體積在250μL以下,用一般光電比色計無法完成測試,因此對酶標(biāo)儀中的光電比色計有特殊要求。
分光光度計,又稱光譜,是將成分復(fù)雜的光分解為光譜線的科學(xué)儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。
同為,實驗室內(nèi)測定吸光度的儀器,酶標(biāo)儀和分光光度計存在一些不同之處,具體差別體現(xiàn)在以下三個方面:
(1)盛裝待測溶液的容器:
分光光度計用的是比色皿,酶標(biāo)儀使用的是塑料微孔板(酶標(biāo)板)。比色皿只能起到盛裝溶液的作用,每個比色皿一次只能盛裝一種溶液。酶標(biāo)板常用透明的聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用,因此用它作為固相載體,酶標(biāo)板通常為48孔或96孔,每個微孔可以盛裝不同的溶液。
(2)光路的方向:
分光光度計是水平光路,而酶標(biāo)儀則是垂直光路。由于酶標(biāo)板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。垂直光的特點是標(biāo)本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小,不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標(biāo)板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
(3)光路的長度:
由于光密度(OD值)與吸光系數(shù), 待測組分的濃度以及光路長度成正比關(guān)系。
分光光度計采用的比色杯的寬度通常是1cm,所以光路長度固定為1cm。因此不同儀器,不同批次測量的數(shù)據(jù)具有同樣的可比性。
而酶標(biāo)儀采用的是垂直光路, 所以光路的長度應(yīng)該是液體液面的高度。所以測得的值受到樣品的體積的影響。
二、酶標(biāo)儀和分光光度計的優(yōu)缺點比較
分光光度計:
優(yōu)點:1、檢測波長范圍較寬;2、加樣量不一致對測量結(jié)果沒有影響。
缺點:1、工作量大,操作繁瑣,耗時;2、耗試劑;3、結(jié)果穩(wěn)定性差,重復(fù)性較差,誤差較大;4、對于微量物質(zhì),難以檢測到。
主要應(yīng)用領(lǐng)域:藥品檢驗、藥物分析、環(huán)境檢測、衛(wèi)生防疫食品、化工、科研等領(lǐng)域?qū)ξ镔|(zhì)進(jìn)行定性、定量分析。
酶標(biāo)儀:
優(yōu)點:1、一次性處理樣品量大,省時;2、樣本、試劑用量少;3、操作簡單,重復(fù)性好,檢測速度快、效率高。
缺點:1、酶標(biāo)儀96孔板在紫外光區(qū)有較強(qiáng)的紫外吸收,應(yīng)盡量避免在300nm以下使用酶標(biāo)儀進(jìn)行含量測定;2、必須確保微孔板每個孔加樣量嚴(yán)格一致,對實驗者的操作技能提出了更高的要求。
主要應(yīng)用領(lǐng)域:臨床檢驗、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)等。
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